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β-actin promoter를 이용한 growth hormone GFP fusion transgene 도입 시 나타나는 zebrafish의 GFP 발현 양상과 성장

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Alternative Title
Growth and expression pattern of GFP in transgenic zebrafish using its β-actin promoter
Abstract
The objective of this study is to make the faster-growing transgenic zebrafish than the non-transgenic control. For this purpose, a transgenic vector has been constructed by using several genes such as β-actin promoter, first exon and intron regions of β-actin, growth hormone and GFP (green fluorescent protein). The recombinant vector was delivered to the one-cell stage of zebrafish eggs through the microinjection method. The expression of transgene in the zebrafish was monitored by observing GFP expression temporally and spatially.
As a result, GFP expression first appeared in the shape of sporadic spots on the embryo at the gastrula period of 50%-epiboly. Later, these spots were transformed to be the rod-shape of GFP expressions at the segmentation period. At the pharyngula and hatching period, GFP was sporadically expressed at the epidermis, muscle tissue, yolk sac, fin-ray, etc.
Among 1,000 eggs microinjected, 16.03% were hatched out. 53.21% of hatched embryos showed GFP expression and some of them showed a maximum of 1.5-fold larger body length than their non-transgenic siblings.
이 연구의 목적은 기존의 zebrafish보다 빠르게 성장하는 zebrafish를 만드는 데 있다. 이를 위한 도입유전자의 vector 조합은 pEGFP-1 vector에 β-actin promoter 부위와 β-actin 유전자의 1st exon과 1st intron까지를 포함하는 promoter 영역, 그리고 growth hormone 유전자를 사용하였다. 재조합 백터 도입 방법은 미세주입방법을 사용하였으며 도입된 유전자의 발현 양상은 GFP 표식유전자의 발현을 관찰함으로써 모니터링하였다.
그 결과, 형질전환 zebrafish (Danio rerio)에서 표식유전자의 발현은 최초 gastrula period (50%-epiboly)에서 피포를 감싸고 있는 산발적인 점 형태로 나타났다. 또한 segmentation period에서 GFP 발현양상은 일부 점이 가는 막대 모양으로 바뀌는 것을 관찰 할 수 있었다. Pharyngula period와 hatching period에서는 상피, 근육조직, 난황낭, 지느러미에서 GFP의 발현이 관찰되었다.
Microinjection한 약 1,000 개의 수정란 중 16.03%의 알이 부화되었으며, 부화한 치어 중 53.21%에서 GFP 발현이 관찰되었다.
GFP 발현을 보이는 어류와 대조구 어류 사이에 약간의 성장차이를 나타내었으며, microinjection한 어류에서 대조구의 평균보다 최대 1.5배 빨리 성장하는 어류가 관찰되었다.
Author(s)
한송헌
Issued Date
2008
Awarded Date
2008. 2
Type
Dissertation
URI
http://dcoll.jejunu.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000004213
Alternative Author(s)
Han, Song-Hun
Affiliation
제주대학교 대학원
Department
대학원 수산생명의학과
Advisor
이제희
Table Of Contents
Ⅰ. 서론 = 1
Ⅱ. 재료 및 방법 = 4
1. 사육조건과 수정란 수집 = 4
2. DNA 조작 = 5
1) β-actin promoter 분리 = 5
2) Growth hormone cDNA 분리 = 6
3) pβGH-EGFP 발현 vector 제작 = 7
3. Microinjection = 10
4. 형광 현미경을 통한 GFP 발현 확인 및 체장 측정 = 11
Ⅲ. 결과 = 12
1. pβGH-EGFP 발현 vector 제작 = 12
2. pβGH-EGFP 발현 양상 = 15
3. pβGH-EGFP 발현 zebrafish의 생존률 및 체장 측정 = 19
Ⅳ. 고찰 = 22
Ⅴ. 요약 = 25
Ⅵ. 참고 문헌 = 26
감사의 글 = 32
Degree
Master
Publisher
제주대학교 대학원
Citation
한송헌. (2008). β-actin promoter를 이용한 growth hormone GFP fusion transgene 도입 시 나타나는 zebrafish의 GFP 발현 양상과 성장
Appears in Collections:
General Graduate School > BMarine Life Sciences
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