사과 겹무늬 썩음병 감염에 의해 유도되는 유전자의 특성
- Alternative Title
- Characterization of Putative-resistant Genes from Apple Infected with White Rot Pathogen
- Abstract
- 사과겹무늬썩음병 병원균에 의해 감염된 사과에서 과 발현된 유전자들 중에 DEG16 clone을 Genomic PCR 과 RT-PCR로 분리하였다. Genomic DNA서열과 cDNA서열을 GenBank에 등록된 서열들과 비교한 결과 게놈구조는 3개의 exon과 1개의 intron으로 구성되어 있음을 확인 하였고, 66개의 아미노산으로 구성된 작은 분자량의 Metallothionein-like protein type3를 암호화 하고 있음을 알 수 있었다. DEG16 clone에 의한 Metallothilnein-like protein type3의 항균활성을 in vitro에서 확인하기 위해 DEG16clone을 대장균에서 발현시켰다. 생산된 단백질은 Amet단백질이라 부르기로 했다. 대장균에 의해 생산된 Amet단백질이 포함된 추출물을 이용해 dendroid test를 수행하여 사과 겹무늬썩음병 병원균에 대한 항균활성 여부를 조사한 결과 Amet단백질 포함된 plate에서 Botryosphaeria dothidea의 성장이 억제됨을 확인 할 수 있었다. Amet단백질은 사과 겹무니썩음병에 대하여 저항성을 가지고 있다고 사료된다.
- Issued Date
- 2010
- Awarded Date
- 2010. 2
- Type
- Dissertation
- Alternative Author(s)
- Kang, Yeo Jin
- Affiliation
- 제주대학교 대학원
- Department
- 대학원 생명공학과
- Advisor
- 김인중
- Table Of Contents
- 목 차
목 차•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••Ⅰ
LIST OF FIGURES••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••Ⅳ
LIST OF TABLES•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••Ⅵ
Ⅰ. 서론•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••1
Ⅱ. 사과 추출물에 의한 항균활성 검정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••6
1. Abstract••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••6
2. 재료 및 방법•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
1) 사용시료••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
2) 사과 추출물의 조제•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
3) 감염여부와 사과 과실 부위별 추출용매에 따른 항균활성측정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••11
3. 결과 및 고찰•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
1) 항균활성측정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
2) 사과 과실 부위별 추출용매에 따른 항균활성측정•••••••••••••••••14
Ⅲ. 사과 겹무늬썩음병 감염에 의해 유도되는 유전자 특성•••••••••••••••••16
1. Abstract•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••16
2. 재료 및 방법•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••18
1) 공시재료••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••18
2) 사과 겹무늬썩음병 병원균(Botryosphaeria dothidea)에 의한 사과 과일 감염 및 배양••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••18
3) 사과 과일로부터의 Total RAN 추출•••••••••••••••••••••••••••••••••••18
4) First-strand cDNA 합성 과 GeneFishingTM PCR••••••••••••••••19
5) 염기서열 분석•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••20
6) RT-PCR••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••20
3. 결과 및 고찰•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••22
1) DEG screening을 통한 사과 겹무늬썩음병원균 감염에 의해 발현이 유도되는 유전자 분리•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••22
2) 감염에 의한 발현 유도성 유전자의 생물정보 분석••••••••••••••••34
3) RT-PCR에 의한 과발현 유도성 유전자의 확인 및 생리적 특성••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••37
Ⅳ. 사과 유래 Amet단백질의 항진균성 측정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••41
1. Abstract•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••41
2. 재료 및 방법•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••42
1) 사용시료••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••42
2) Genomic PCR & RT-PCR,염기서열분석 및 계통분류•••••••••••••42
3) 사용균주 및 발현벡터•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••49
4) 추출물의 준비••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••51
5) 항진균성측정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••51
3. 결과 및 고찰 •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••53
1) 병저항성 후보 유전자 분리••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••53
2) 항진균성측정••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••58
Ⅴ. 참고문헌••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••61
- Degree
- Master
- Publisher
- 濟州大學校 大學院
- Citation
- 강여진. (2010). 사과 겹무늬 썩음병 감염에 의해 유도되는 유전자의 특성
- Appears in Collections:
- General Graduate School > Biomaterials Science and Technology
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