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Bacillus sp. IS-2가 생산하는 대사산물의 생리활성 및 사료 내 첨가에 따른 양식 넙치의 면역반응과 병저항성에 미치는 영향

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Alternative Title
Isolation and Cultural Characterization of Antibacterial Substance Produced Bacterium, Bacillus sp. IS-2 and Supplementation Infeed on Immune Response, Disease resistance in olive flounder, Paralichthys olivaceus
Abstract
The purpose of this experiment was to select useful probiotic strains with antibacterial activity and acid resistance against a broad range of bacteria causing fish diseases to prevent bacterial diseases of fishes or improve their immune system for the efficiency of farming industry.
Five kinds of strains extracted from Kimchi, salted farmed flatfish, and salted fishes were used to study their antibacterial activity, bile resistance, and acid resistance, and Bacillus sp. IS-2 was finally selected to examine their cultural, morphological, genetic, and physiological characteristics. In result of identification, Bacillus sp. IS-2 was identified as Bacillus subtillis, Bacillus velzensis, and Bacillus amyloliquefaciens and named Bacillus sp. IS-2. In result of reviewing the optimal culturing conditions for maximum production of antibacterial materials, the source of carbon was 1% soluble starch; the source of nitrogen was 0.5% malt extracts and 0.5% NaNO3; the inorganic salt was 0.1% NaCl; the culturing temperature was 35℃; the initial pH of culture medium was 8; and the culturing time was 120 hours.
The strains were added to the feed in the concentration of 103, 105, and 107 CFU/kg and 2% of fishes were given the feed twice a day (8 AM and 5 PM) for 12 weeks. In result of the nonspecific immune response study to examine Lysozyme activity, Phagocytosis activity, and respiratory burst every two weeks until the end of the study, all test samples showed greater activities than control samples and improved immune activity with Bacillus sp. IS-2. The mortality test performed by artificial infection using S.iniae, a pathogenic bacterium, after the completion of this study also showed over 55% greater survival rate in all test samples. In result of performing PCR using the universal primer to verify that the probiotic stays in the intestines of the fishes, all test samples showed PCR product of 1465 bp. Based on the above findings, it was concluded that Bacillus sp. IS-2 in the feed improved farmed flatfish's immune system and resistance against diseases as the probiotic. Also, the physiological indicators discovered by this study would be useful for identifying the mechanisms of probiotics.
Author(s)
장익수
Issued Date
2011
Awarded Date
2012. 2
Type
Dissertation
URI
http://dcoll.jejunu.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000005914
Alternative Author(s)
Jang, Ik Soo
Affiliation
제주대학교
Department
대학원 해양생명과학과
Advisor
허문수
Table Of Contents
목 차 ⅰ
List of Tables ⅲ
List of Figures ⅳ
Abstract ⅵ
Ⅰ. 서 론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 4
2-1. Probiotic 균주의 분리 및 선정 4
2-1-1. 미생물의 분리 4
2-1-2. 분리균주의 항균활성 측정 6
2-1-3. 인공 위액 및 인공 담즙산에 대한 내성, 내염성, 내열성, 용혈성 8
2-1-4. 공시균주의 선정 9
2-2. Bacillus sp. IS-2의 동정 10
2-2-1. 형태학적 특성 10
2-2-2. 생리학적 특성 10
2-2-3. 16S rRNA 염기서열 분석 11
2-3. 조건에 따른 Bacillus sp. IS-2의 생육과 항균활성 검토 12
2-3-1. 탄소원의 배지조성 12
2-3-2. 질소원의 배지조성 13
2-3-3. 무기염의 배지조성 13
2-3-4. 최적 pH, 온도에 따른 성장과 항균물질 생산 13
2-3-5. 배양시간에 따른 항균물질의 생산 14
2-3-6. 항균물질의 첨가에 따른 피검균 (S. iniae )의 세포형태 관찰 14
2-4. Bacillus sp. IS-2의 첨가에 따른 양식넙치의 면역반응과 병저항성 15
2-4-1. 실험어 사육관리 15
2-4-2. 실험사료 제작 및 투여방법 15
2-4-3. 성장도 조사 및 혈액학적 분석 16
2-4-4. Respiratory burst activity 16
2-4-5. 혈청의 lysozyme 활성 17
2-4-6. Phagocytosis activity 17
2-4-7. 어병세균에 의한 공격실험 18
2-4-8. 사료 첨가 내 사용된 공시 균주의 장내 확인 18
2-4-9. 통계처리 18
Ⅲ. 결 과 19
3-1. Probiotic 균주의 분리 및 선정 19
3-1-1. 미생물의 분리 19
3-1-2. 분리균주의 항균활성 측정 20
3-1-3. 인공 위액 및 인공 담즙산에 대한 내성, 내염성, 내열성, 용혈성 22
3-1-4. 공시균주의 선정 23
3-2. Bacillus sp. IS-2의 동정 24
3-2-1. 배양학적, 형태학적 특성 24
3-2-2. 생리학적 특성 26
3-2-3. 16S rRNA 염기서열 분석 26
3-3. 조건에 따른 Bacillus sp. IS-2의 생육과 항균활성 검토 30
3-3-1. 탄소원의 영향 30
3-3-2. 질소원의 영향 32
3-3-3. 무기염의 영향 34
3-3-4. 최적 온도, pH의 따른 생육과 항균물질 생산 36
3-3-5. 배양시간에 따른 항균물질의 생산 38
3-3-6. 항균물질의 첨가에 따른 피검균 (S. iniae)의 세포형태 관찰 40
3-4. Bacillus sp. IS-2의 첨가에 따른 양식넙치의 면역반응과 병저항성 41
3-4-1. 성장도 조사 41
3-4-2. 혈액학적 분석 42
3-4-3. Respiratory burst activity 44
3-4-4. 혈청의 lysozyme 활성 46
3-4-5. Phagocytosis activity 48
3-4-6. 어병세균에 의한 공격실험 49
3-4-7. 사료 첨가 내 사용된 공시 균주의 장내 확인 50
Ⅳ. 요 약 52
Ⅴ. 감사의 글 53
Ⅵ. 참고 문헌 54
Degree
Master
Publisher
제주대학교 대학원
Citation
장익수. (2011). Bacillus sp. IS-2가 생산하는 대사산물의 생리활성 및 사료 내 첨가에 따른 양식 넙치의 면역반응과 병저항성에 미치는 영향
Appears in Collections:
General Graduate School > Marine Life Sciences
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