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'부지화' 잎·가지 추출물의 항염 및 항산화 활성 성분 연구

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Alternative Title
Anti-inflammatory and Anti-oxidative Constituents from 'Shiranuhi' Leaves and Branches
Abstract
In this study, we investigated anti-inflammatory and anti-oxidative constituents from 'Shiranuhi ((Citrus unshiu Marc. × C. sinensis Osbeck) × C. reticulata Blanco)' leaves and branches. The chemical structures of the isolated compounds were elucidated based on the spectroscopic data including NMR spectra, as well as comparison of the data to the literature values. Five phytochemicals were isolated from the extract of 'Shiranuhi' leaves; sinensetin (1), isosinensetin (2), 5-desmethylsinensetin (3), 7-hydroxy -5,6,3',4'-tetramethoxyflavone (4) and hesperidin (5). As far as we know, compounds 2, 3 and 4 were isolated for the first time from this plant. On the anti-inflammation studies using RAW264.7 cells, the EtOAc fraction and compounds 1-4 inhibited the production of NO, PGE2 and pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6) effectively. For the anti-oxidation tests, the compound 5 showed strong ABTS+ radical scavenging activity with SC50 25.8 μM, and its activity was comparable to a positive control BHT (SC50 29.8 μM). Seven constituents were isolated from the extract of 'Shiranuhi' branches; nobiletin (1), sinensetin (2), tetramethylscutellarein (3), 6-hydroxy-5,7,3',4'-tetramethoxyflavone (4), 5-desmethylsinensetin (5), cirsimaritin (6) and hesperidin (7). As far as we know, compounds 4, 5 and 6 were isolated for the first time from this plant. On the anti-inflammation studies using RAW264.7 cells, the EtOAc fraction and compounds 1, 3 and 4 inhibited the production of NO, PGE2 and pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6) effectively. For the anti-oxidation tests, the compound 4 (SC50 128.7 μM) showed stronger DPPH radical scavenging activity than BHT (SC50 402.2 μM), a positive control. Also, the compound 4 (SC50 17.9 μM) showed stronger ABTS+ radical scavenging activity than BHT (SC50 29.8 μM), a positive control. Based on these results, it was suggested that extract and isolated compounds from 'Shiranuhi' leaves and branches could be potentially applicable as anti-inflammatory and/or anti-oxidative ingredients.
Author(s)
조연정
Issued Date
2017
Awarded Date
2017. 2
Type
Dissertation
URI
http://dcoll.jejunu.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000007999
Alternative Author(s)
YeonJeong Jo
Affiliation
제주대학교 일반대학원
Department
대학원 화학과
Advisor
이남호
Table Of Contents
I. 서론 1
II. 재료 및 방법 6
1. 시약 및 기기 6
2. 재료 7
3. 생리 활성 평가 8
1) 항염 8
(1) RAW264.7 cell 배양 8
(2) Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성 측정 8
(3) PGE2 및 전염증성 cytokine 생성 억제 활성 측정 8
(4) 세포 독성 평가(MTT assay) 9
2) 항산화 10
(1) 총 폴리페놀 함량 측정 10
(2) 총 플라보노이드 함량 측정 11
(3) DPPH radical 소거 활성 측정 11
(4) ABTS+ radical 소거 활성 측정 12
Ⅲ. 연구 1 : 부지화 잎 추출물의 항염 및 항산화 활성 성분 연구 13
1. 부지화 잎의 추출, 분획 및 활성 성분 분리 13
1) 부지화 잎의 추출 및 용매 분획 13
2) Ethyl acetate 분획물의 활성 성분 분리 14
2. 분리된 화합물의 구조 분석 15
1) Compound 1, 2의 구조 동정 15
2) Compound 3, 4의 구조 동정 20
3) Compound 5의 구조 동정 26
3. 부지화 잎 추출물 및 분획물의 활성 실험 결과 29
1) 항염 29
(1) Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성 측정 29
(2) PGE2 및 전염증성 cytokine 생성 억제 활성 측정 32
2) 항산화 34
(1) 총 폴리페놀 함량 측정 34
(2) 총 플라보노이드 함량 측정 35
(3) DPPH radical 소거 활성 측정 36
(4) ABTS+ radical 소거 활성 측정 37
4. 분리된 화합물의 활성 실험 결과 38
1) 항염 38
(1) Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성 측정 38
(2) Compound 3, 4의 PGE2 및 전염증성 cytokine 생성 억제 활성 측정 41
① Compound 3 41
② Compound 4 43
2) 항산화 45
(1) DPPH radical 소거 활성 측정 45
(2) ABTS+ radical 소거 활성 측정 46
5. 요약 및 결론 47
Ⅳ. 연구 2 : 부지화 가지 추출물의 항염 및 항산화 활성 성분 연구 49
1. 부지화 가지의 추출, 분획 및 활성 성분 분리 49
1) 부지화 가지의 추출 및 용매 분획 49
2) Ethyl acetate 분획물의 활성 성분 분리 50
2. 분리된 화합물의 구조 분석 51
1) Compound 1, 2, 3의 구조 동정 51
2) Compound 4, 5, 6, 7의 구조 동정 56
3. 부지화 가지 추출물 및 분획물의 활성 실험 결과 61
1) 항염 61
(1) Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성 측정 61
(2) PGE2 및 전염증성 cytokine 생성 억제 활성 측정 64
2) 항산화 66
(1) 총 폴리페놀 함량 측정 66
(2) 총 플라보노이드 함량 측정 67
(3) DPPH radical 소거 활성 측정 68
(4) ABTS+ radical 소거 활성 측정 69
4. 분리된 화합물의 활성 실험 결과 70
1) 항염 70
(1) Nitric oxide (NO) 생성 억제 활성 측정 70
(2) Compound 4의 PGE2 및 전염증성 cytokine 생성 억제 활성 측정 73
2) 항산화 75
(1) DPPH radical 소거 활성 측정 75
(2) ABTS+ radical 소거 활성 측정 76
5. 요약 및 결론 77
Ⅴ. 종합 결론 및 고찰 79
Ⅵ. 참고문헌 81
Degree
Master
Publisher
제주대학교 일반대학원
Citation
조연정. (2017). '부지화' 잎·가지 추출물의 항염 및 항산화 활성 성분 연구
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