Effects of three phenols on vitellogenin synthesis in Chinese minnow, rhynchocypris oxycephalus hepatocytes

Abstract

Vitellogenin (VTG; 난황전구물질) 합성은 estradiol-17b (E2) 처 리에 의해 미성숙한 암컷과 수컷 어류의 간에서 유도되었고, 내분비계장애물질 들도 (EDCs) 수컷 어류에서 VTG를 합성시켰다. 수컷 어류에서 VTG 생산은 EDCs estrogenic potential에 대한 sensitive biomarker고 간주된다. bisphenol A (BPA), nonylphenol (NP) 그리고 4-tert-octylphenol (OP)는 내분비계장애물질로 널리 알려졌고 어류에서 estrogenic 활성을 가진다. 이 실 험에서, BPA, NP 그리고 OP가 버들치의 초대 간세포 배양에서 in vitro에서 VTG 합성을 비교하였다. E2 처리된 수컷 어류의 plasma에 VTG 분자량은 SDS-PAGE로 분 석한 결과 134.0 kDa 이었다. Western-blot은 제작된 항체 (ab.a-E)가 E2 처리 된 수컷 어류의 plasma와 하나의 band를 형성하였다. 성숙한 암컷과 E2 처리된 수컷 어류의 VTG는 면역화학적인 방법으로 탐색하였다. 면역확산양상은 암 컷 plasma, 난 추출물 그리고 E2 처리된 수컷 어류의 plasma가 항체와 반응하였 다. 면역조직화학적 반응은 성숙한 난모세포의 난황과립, 여포세포층 그리고 난막들이 항체와 강하게 반응하였다. 간세포 초대배양을 위해, 간세포는 collagenase의해 분리되었고, 분리된 간세포들은 18℃조건의 Leibovize-15 medium에 배양하였다. E2, 페놀류 (BPA, NP 그리고 OP) 그리고 tamoxifen은 에탄올에 용해시키고 초대 배양 이틀 후에 배양액에 첨가하였다. E2, 페놀류 그 리고 tamoxifen은 각각 10-6 -10-5 M, 10-6 -10-3 M 그리고 10-6 M 농도로 처리하 였다. 배양액들은 호르몬 처리 4일 후에 culture plate에서 회수하였다. 배양액 에 분비된 VTG는 버들치의 난 추출물에서 개발한 항체를 사용하여 ELISA로 측정하였다. VTG 합성은 E2 와 페놀류 (BPA, NP 그리고 OP) 처리에 의해 유도 되었다. E2 10-6 M 이상 농도는 VTG 양의 증가를 초래하였다 (P<0.05). BPA 10-5 M 그리고 NP, OP 10-4 M에서 VTG 합성이 유도되었다(P<0.01). 그러나, BPA, NP 그리고 OP 10-3 M은 독성 효과로 VTG 합성이 유도 되지 않았다. 이러 한 결과들은 BPA가 버들치 간세포에 있어 estrogenic potential이 높은 것으로 사료된다. E2와 tamoxifen을 첨가한 처리구는 VTG양이 감소하여 나타났다. tamoxifen은 E2에 의한 VTG의 생산을 저해하여, anti-estrogen으로 생각되 어진다. 앞으로, BPA, NP 그리고 OP가 in vivo 하에 VTG 합성을 비교하고, E2 priming와anti-estrogen 같은 다양한 호르몬이 VTG 합성효과에 대한 비교검 토가 요구된다.

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