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제주 재래귤, '부지화' 미숙과 추출물 및 감귤 정유 성분의 기능성 화장품 소재화 연구

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Alternative Title
A Study on the Utilization of Extracts from Immature Fruits of Jeju-native Citrus and 'Shiranuhi' and Citrus Essential Oils as Cosmeceutical Ingredients
Abstract
The peel of Citrus fruit is rich in pectin, flavonoids, limonoids and
coumarins that are valuable and functional dietary ingredients for human
health. However, Citrus immature fruit peels produced by thinning were
mostly discarded as a waste. Therefore, utilization of this peel waste has
received much attention.
'Shiranuhi ((Citrus unshiu Marc. ⅹ C. sinensis Osbeck) ⅹ C. Reticulata
Blanco)' and 'Hongkyool (Citrus tachibana Tanaka)' immature fruit peel
(SIFP, HIFP) used in this study was collected from Jeju Citrus Research
Institute (RDA), and then extracted with 80% ethanol. After that, SIFP was
analyzed and purified using RP-C_(18) column equipped with MPLC. The
structures of purified compounds were confirmed by ^(1)H and ^(13)C NMR.
Ethyl acetate fraction of SIFP (SIFP-E) and compound 3-4 showed potent
DPPH and ABTS radical scavenging activity. Anti-inflammatory activity of
SIFP-E and compound 4 were examined using RAW264.7 murine
macrophage cells stimulated with LPS. As a result, SIFP-E and compound 4
had inhibited a nitric oxide (NO) and pro-inflammatory cytokine (TNF-α,
IL-1β, IL-6 and PGE_(2)) productions significantly.
Solvent fractions of HIFP were investigated for anti-oxidative and antiinflammatory
effects. The total polyphenol content and total flavonoid
content were the highest in the butanol fraction of 'Hongkyool' (HIFP-B,
5,344 ㎎/g). The HIFP fractions showed the strong antioxidant activities by
DPPH method and ABTS method. The 'Hongkyool' ethyl acetate fraction
(HIFP-E) inhibited the generation of nitric oxide, IL-6, iNOS and COX-2
protein expression. Based on these results, we suggest that ' Shiranuhi'
and 'Hongkyool' immature fruit peel maybe has the possibility for use as an
anti-inflammatory and anti-oxidant agent.
This study was also designed to analyze the chemical composition of
essential oil in 4 cultivars of Citrus fruit and to test their biological
activities. Essential oils were obtained by steam distillation from fruits
collected from Jeju Island and were analyzed using GC/MSD and thirteen
components were identified in the essential oil. Since acne vulgaris is the
combined result of a bacterial infection and the inflammatory response to
the infection, we examined whether citrus essential oils (CEOs) possessed
antibacterial against skin pathogens. As a result, CEOs showed good
antibacterial activities against drug-susceptible and –resistant
Propionibacterium acnes. In this study, CEOs were examined on DPPH,
hydroxyl, alkyl radical scavenging activities by ESR spectrophotometer,
respectively. Based on these results, we suggest that essential oil of citrus
fruit could be used as an antibacterial and antioxidant agent.
Author(s)
현주미
Issued Date
2016
Awarded Date
2016. 8
Type
Dissertation
URI
http://dcoll.jejunu.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000007838
Alternative Author(s)
Hyun, Ju Mi
Department
대학원 화학과
Advisor
이남호
Table Of Contents
LIST OF TABLES iv
LIST OF FIGURES v
SYMBOLS AND ABBREVIATIONS viii
ABSTRACT 1
I. 서 론 3
II. 재료 및 방법 12
1. 재료 12
2. 실험방법 17
1) 부지화 미숙과 과피의 유효 성분 분리 및 분석 17
가. 부지화 미숙과 과피의 추출 및 용매 분획 18
나. MPLC를 이용한 EtOAc fraction의 활성 성분 분리 19
2) 제주 재래귤 추출물의 성분 분석 20
3) 감귤 정유의 추출 및 성분 분석 22
가. 온주, 하귤, 하밀감 및 신예감 정유의 추출 22
나. GC-MS 성분 분석 23
3. 생리 활성 평가 24
1) 총 페놀 함량 측정 24
2) 총 플라보노이드 함량 측정 24
3) DPPH radical scavenging 활성 검색 24
4) ABTS radical scavenging 활성 검색 25
5) 세포 배양 25
6) Nitric oxide (NO) 측정 25
7) Pro-inflammatory cytokine 억제 활성 측정 26
8) 미백 활성 측정 26
9) 세포 독성 평가 26
10) Immunoblotting 27
11) ESR spectrometer를 이용한 항산화 활성 28
가. ESR을 이용한 DPPH radical scavenging 활성 검색 29
나. ESR을 이용한 hydroxyl radical scavenging 활성 검색 30
다. ESR을 이용한 alkyl radical scavenging 활성 검색 31
12) 항균 활성 평가 32
III. 결과 및 고찰 33
1. 부지화 미숙과 추출물의 유효 성분 분리 및 생리 활성 평가 33
1) 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 측정 33
2) DPPH radical scavenging 활성 검색 36
3) ABTS radical scavenging 활성 검색 36
4) Nitric oxide (NO) 억제 활성 및 세포 독성 측정 38
5) Pro-inflammatory cytokine 억제 활성 측정 40
6) 미백 활성 측정 45
7) HaCaT human keratinocyte에 대한 독성 평가 47
8) 부지화 미숙과 과피 EtOAc fraction에서 분리된 화합물의 구조 결정 49
9) 분리된 화합물의 생리 활성 평가 55
10) 분리된 화합물의 항산화 활성 56
11) 분리된 화합물의 세포 독성 및 nitric oxide (NO) 저해 활성 58
12) Compound 4의 pro-inflammatory cytokine 저해 활성 60
13) 분리된 화합물의 미백 활성 65
2. 제주 재래귤 미숙과(과피, 과육) 성분 분석 및 항산화 활성 67
1) 제주 재래귤 미숙과 과피 및 과육 추출물의 HPLC 분석 결과 67
2) 추출물의 항산화 활성 84
가. 추출물의 DPPH radical 소거 활성 84
나. 추출물의 ABTS radical 소거 활성 85
3) 홍귤 미숙과 과피 추출물의 생리 활성 평가 88
가. 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량 측정 90
나. DPPH radical 소거 활성 91
다. ABTS radical 소거 활성 93
라. 홍귤 EtOAc fraction의 항염 효능 측정 95
마. Pro-inflammatory cytokine 억제 활성 97
바. iNOS, COX-2 단백질 발현량 측정 98
3. 감귤 정유의 성분 분석 및 활성 평가 100
1) 온주, 하귤, 하밀감 및 신예감 정유의 GC-MS 성분 분석 100
2) ESR을 이용한 항산화 활성 103
3) 온주, 하귤, 히말감 및 신예감 정유 성분의 항균 활성 105
IV. 종합 결론 및 고찰 107
V. 참고 문헌 108
Degree
Doctor
Publisher
제주대학교 대학원
Citation
현주미. (2016). 제주 재래귤, '부지화' 미숙과 추출물 및 감귤 정유 성분의 기능성 화장품 소재화 연구
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General Graduate School > Chemistry
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